目前，胸膜肺炎放線桿菌比較難以分離，其原因有待進一步研究。本研究分離出6株APP地方分離株，人ELISA試劑盒對我國豬傳染性胸膜肺炎的病原學與流行病學研究積累了一定的菌株資源。同時，對ApxⅡ-ELISA和ApxⅣ-ELISA兩種抗體檢測試劑盒進行了產(chǎn)業(yè)化研究，其中ApxⅣ-ELISA達到臨床應用水平，對豬傳染性胸膜肺炎的診斷與防控具有十分重要的意義。
胸膜肺炎放線桿菌是引起豬傳染性胸膜肺炎的病原，給養(yǎng)豬業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。目前共有15個血清型，該病原菌的主要毒力因子包括CPS、LPS、OMP、TBP、粘附因子、內(nèi)毒素、尿素酶等。Apx毒素是APPzui主要的毒力因子，現(xiàn)證明不同血清型的菌株可產(chǎn)生4種Apx，ApxⅡ除血清型10和14以外，其它血清型都分泌；任何血清型都能在體內(nèi)分泌毒素蛋白ApxⅣ，但體外培養(yǎng)的細菌卻不能分泌該毒素。
本研究包括如下三方面的內(nèi)容：
1．胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定 將病料接種培養(yǎng)基，經(jīng)過24小時的培養(yǎng)后將細菌進行純化，挑單菌落革蘭氏染色、鏡檢，將細菌接種到細菌鑒定微量反應管，同時以細菌制備模板，做apxⅣ-PCR，然后經(jīng)過瓊脂擴散試驗確定血清型。結(jié)果從患病豬的肺、關(guān)節(jié)分離到胸膜肺炎放線桿菌6株，其中，4株4型，1株3型，1株未定型。
2．胸膜肺炎放線桿菌ApxⅡ-ELISA抗體檢測試劑盒的研制及其應用 根據(jù)ApxⅡ的特點，實驗室已經(jīng)建立了一種能夠監(jiān)測疫苗免疫后的抗體水平和對疫苗免疫效果進行評估的血清學方法ApxⅡ-ELISA；本研究將該診斷方法進一步研制成試劑盒，對其特異性、敏感性、重復性和穩(wěn)定性進行了測試，與間接血凝試驗試劑盒進行了對比研究，并用該試劑盒檢測了來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的臨床豬血清1453份，同時也制作了ApxⅡ的抗體削長規(guī)律曲線 結(jié)果表明ApxⅡ-ELISA試劑盒具有很高的特異性和敏感性；三批試劑盒的批內(nèi)和批間的重復性良好（變異系數(shù)均＜15％）；人ELISA試劑盒試劑盒在2～8℃保存9個月內(nèi)穩(wěn)定性良好；檢測來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的臨床豬血清的陽性率分別為49.56％、85.51％、1.92％、73.33％、1.85％和100％。從ApxⅡ抗體消長規(guī)律的曲線可以看出，疫苗免疫后3周或者4周就可以監(jiān)測到ApxⅡ抗體，抗體水平達到峰值時，其值為1∶1280。ApxⅡ-ELISA試劑盒能夠有效的診斷豬傳染性胸膜肺炎，同時也可作為一種評價豬群免疫后免疫效果的有效方法；
3．胸膜肺炎放線桿菌ApxⅣ-ELISA抗體檢測試劑盒的研制及其應用 根據(jù)ApxⅣ的特點，實驗室已經(jīng)建立了一種能夠特異性的診斷豬傳染性胸膜肺炎，并且能夠有效的區(qū)分感染豬與免疫豬的鑒別診斷方法ApxⅣ-ELISA。本研究將該診斷方法進一步研制成試劑盒，對其特異性、敏感性、重復性和穩(wěn)定性進行了測試，與間接血凝試驗及IDEXX公司的CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒進行了對比研究，并用該試劑盒檢測了來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的臨床豬血清1453份，同時也制作了ApxⅣ的抗體削長規(guī)律曲線。人ELISA試劑盒 結(jié)果表明ApxⅣ-ELISA試劑盒具有很高的特異性和敏感性，與CHEKIT-APP-APXⅣ試劑盒的檢測符合率為91.37％；三批試劑盒的批內(nèi)和批間的重復性良好（變異系數(shù)均＜15％）；試劑盒在2～8℃保存9個月內(nèi)穩(wěn)定性良好；App感染后3周或者4周就可以監(jiān)測到ApxⅣ抗體，抗體水平達到峰值時，其值為1∶640。檢測來自中國、美國、加拿大、丹麥、澳大利亞和英國的臨床豬血清的陽性率分別為22.30％、39.72％、0.64％、42.22％、1.85％和93.94％。ApxⅣ-ELISA試劑盒能夠有效區(qū)分APP感染豬與三價滅活疫苗或亞單位疫苗免疫豬。
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